Lymfocytseparationsmedium (kanin)

Denna produkt är en gradientdensitetsseparationslösning lämplig för separering av perifera blodlymfocyter från kanin. Dess princip är huvudsakligen baserad på densitetsskillnaden mellan olika perifera blodkroppar (densiteten av röda blodkroppar och granulocyter är cirka 1.090 g/mL; Trombocyter är 1.030-1,035 g/ ml Lymfocyt och monocyt är 1.075-1,090 g/ml) och är separerade från perifert blod genom gradientdensitet centrifugering. Denna produkt är en steril separationslösning med låg endotoxinnivå, färdig att använda med en densitet på 1,083 ± 0,001 g/ml (20 grader). Produkten är optimerad på basis av traditionellt Ficoll-meglumin för att bibehålla stabiliteten hos separationslösningen under längre tid efter blodtillsats, operationen är enkel och de isolerade lymfocyterna är av hög renhet och gott skick.

Skicka med våt is; Förvara 2-8 grad borta från ljus, giltigt i 12 månader.

För separation av 1 mL perifera blodlymfocyter från kanin är volymförhållandet mellan blod och lymfocytseparationsmedium 1:1-1:2, med lämpliga justeringar inom detta intervall; Försiktighet bör iakttas vid val av centrifugrör så att den totala volymen av blod och lymfocytseparationsmedium inte överstiger två tredjedelar av rörets volym.

1. Ta 1 mL färskt antikoagulerande helblod (heparin, EDTA, natriumcitrat och andra antikoagulantia kan användas), späd med lika volym PBS (G4202 rekommenderas) eller Hanks buffert (rekommenderas g4203) innehåller inget kalcium och magnesium för att erhålla 2 ml utspätt helblod.

2. Pipettera 3 mL perifert blodlymfocytisoleringslösning från råttor och möss till ett 15 mL sterilt centrifugrör (EP-1500-J rekommenderas).

3. Luta centrifugröret i 45 grader och tillsätt långsamt 2 mL utspätt blod längs rörväggen in i centrifugröret så att blodet ligger plant på det övre lagret av det perifera blodlymfocytseparationsmediet på kanin.

4. Det rekommenderas att använda en horisontell centrifug, placera röret i den horisontella adaptern, minska hastigheten på centrifugen (3-5 hastigheter är lämpliga) och centrifugera vid 800 xg i 25 minuter vid rumstemperatur.

5. Efter centrifugering hålls röret försiktigt på ett rörställ och en tydlig skiktning observeras: det översta skiktet är plasmaskiktet; det övre mellanskiktet är lymfocytskiktet; det nedre mittskiktet är skiktet av lymfocytseparationsmedium; och det nedersta skiktet är erytrocyt- och granulocytskiktet (se den bifogade figuren).

6. Ta bort det översta plasmaskiktet och aspirera försiktigt tunica albuginea-skiktet (lymfocytskiktet) in i ett nytt sterilt centrifugrör.

7. Tvätta med 8 mL PBS (rekommenderas G4202) eller annan buffert, centrifugera vid 100 xg i 10 minuter och kassera sedan supernatanten

8. Upprepa steg 7 (valfritt);

9. Resuspension av lymfocyter i det medium eller buffert som krävs enligt syftet med experimentet.

10. Lymfocyternas renhet kan förbättras ytterligare genom att plantera de återsuspenderade lymfocyterna i en odlingsskål eller -kolv, inkubera i inkubatorn i 1-2 timmar och sedan överföra de absorberade cellerna till en ny odlingsskål eller -kolv (valfritt) ).

1. Produkten måste vara helt utjämnad och blandas upp och ned i rumstemperatur före användning. Lämplig temperatur för separation är 18-25 grad.

2. För att upprätthålla lymfocyternas aktivitet är det bäst att välja färskt antikoagulerande blod inom 2 timmar efter bloduppsamling; Om ytterligare odling och test av de isolerade lymfocyterna krävs, var uppmärksam på den aseptiska operationen under bloduppsamling och separering.

3. Spädning eller tvättning av bufferten, använd inte bufferten innehåller kalcium- och magnesiumjoner för att undvika blodcellsaggregation

4. Överdriven absorption av komponenter utanför tunica albuginea-skiktet av lymfocyter kommer att göra att vissa granulocyter eller blodplättar vid föreningspunkten blandas.

5. Skillnader mellan blodprover kan ha en inverkan på separationsresultaten. Centrifugalkraften och tiden kan justeras på lämpligt sätt efter den faktiska situationen. Referenscentrifugalkraften och tidsintervallet är 500-1000 g och 20-30 min.

6. Det är normalt att röda blodkroppar sätter sig efter att ha blandat blod och lymfocytseparationsmedium under en viss tid.

7. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär skyddsglasögon, handskar eller skyddskläder.

Bilaga: Schematisk bild av varje lager före och efter separation

Denna produkt är endast avsedd för vetenskapliga forskningsändamål, inte för klinisk diagnos!