Calcein AM Cell Viability Assay Kit (CCK-F)

 

Produktnamn	Katt. Inga	Spec.
Calcein AM Cell Viability Assay Kit (CCK-F)	G1609-100T	100T
	G1609-500T	500T

 

 

Calcein AM är baserat på Calcein (Calcein Acetoxymethyl Ester), och introducerar en acetylmetoximetylester (AM) grupp, som inte bara maskerar den molekylära delen av Calcein som kelerar kalcium utan också förbättrar dess hydrofobicitet, vilket gör att Calcein AM lätt kan tränga in i membranet av levande celler och att klippas av endogena cellulära esteraser till Calcein. Calcein, som förlorat sin AM-grupp, kan inte lätt passera genom cellmembranet och hålls därmed kvar inne i cellen; dessutom är den molekylära delen av det kelaterade kalciumet delvis exponerat, vilket gör att Calcein-sonden kan binda till kalciumjoner i den levande cellen och avge en stark grön fluorescens. Dock saknar döda celler esteras och kan inte hydrolyseras till Calcein AM, så det kan inte märka döda celler. Calcein AM har låg cytotoxicitet och har liten effekt på cellulära funktioner, såsom cellproliferation eller lymfocytkemotaxi, vilket gör det till en utmärkt fluorescerande sond för färgning av levande celler.

 

Denna produkt, Calcein AM Cell Activity Assay Kit, även känd som Cell Fluorescence Counting Kit (CCK-F), är ett analyskit för att utvärdera aktiviteten, toxiciteten och proliferationen av celler genom att märka levande celler med Calcein AM fluorescerande sond. Detta kit har optimerats och trimmats, har inte bara hög detektionskänslighet och brett linjärt område, utan kräver också bara en kort inkubationstid för att slutföra detekteringen av celler. Det är lätt att använda och kräver inte radioisotopmärkning eller steg som kristallisering och upplösning, vilket kan minska felen som orsakas av experimentella operationer och förbättra noggrannheten och reproducerbarheten.

 

 

Fartyg med våt is; lagra vid -20 grader i mörker.; Försök att undvika upprepad frysning och upptining, giltigt i 12 månader.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G1609-100T	G1609-500T
G1609-1	Calcein AM-lösning	100 μL	500 μL
G1609-2	CCK-F analysbuffert	10 ml	50 ml
Manuell		Ett exemplar

 

 

1. Beredning av Calcein AM arbetslösning

För en cellodlingsplatta med 96-brunn, använd 100 ul calcein AM-arbetslösning per brunn. Bered en lämplig mängd calcein AM-arbetslösning enligt följande tabell och blanda noggrant.

 

Komponent	10 analyser	50 analyser	100 analyser
Calcein AM-lösning	10 μL	50 μL	100 μL
CCK-F analysbuffert	1 ml	5 ml	10 ml

 

2. Vidhäftande celldetektion:

Följande steg motsvarar 96-detektionsschemat för brunnsplattor, och andra system med muti-brunnsplattor måste justeras efter situationen.

a. Cellsådd: celler sås jämnt i en 96-brunnsplatta vid en viss densitet och behandlas med läkemedel eller andra förbehandlingar (såddstätheten bestäms av faktorer som cellstorlek, tillväxthastighet, etc.);

b. (Valfritt) Celltvätt: Ta bort odlingsmediet och tvätta cellerna en till två gånger med PBS (rekommenderad G4202) för att avlägsna serum, fenolrött och/eller läkemedel som stör analysen.

c. Sondmärkning: Efter avlägsnande av cellodlingsmedium eller PBS-buffert, tillsätt 100 μL calcein AM-arbetslösning och inkubera vid 37 grader i 30 minuter i mörker.

d. (Valfritt) Cellinkubation: Fortsätt att inkubera i 15-30 min med det nya cellodlingsmediet för att säkerställa att det intracellulära Calcein AM är helt hydrolyserat.

e. Fluorescensdetektion: Efter inkubation, mät fluorescens med en fluorescensmikroplattläsare (den maximala excitationsvåglängden för Calcein AM-sonden är 501 nm och den maximala emissionsvåglängden är 521 nm.) och beräkna cellviabiliteten. Fluorescensintensiteten är proportionell mot antalet viabla celler. Fluorescensmikroskopi kan också användas för att observera färgningsresultaten.

3. Suspensionscellanalys:

a. Cellsådd: celler sås jämnt i en 24-brunnsplatta vid en viss densitet och behandlas med läkemedel eller andra förbehandlingar (såddstätheten bestäms av faktorer som cellstorlek, tillväxthastighet, etc.);

b. (Valfritt) Celltvätt: Centrifugera cellkultur vid 1,000×g i 3-5 minuter, ta bort supernatanten och tvätta cellerna två gånger med PBS för att ta bort serum, fenolrött och/eller läkemedel som stör analysera.

c. Sondmärkning: Efter centrifugering vid 1000 g i 3-5 min, ta bort cellodlingsmediet eller PBS-buffert, tillsätt en lämplig mängd Calcein AM-arbetslösning och inkubera vid 37 grader i 30 minuter i mörker;

d. (Valfritt) Cellinkubation: Fortsätt att inkubera i 15-30 min med det nya cellodlingsmediet för att säkerställa att det intracellulära Calcein AM är helt hydrolyserat.

e. Fluorescensdetektion: Efter inkubation, mät fluorescens med en fluorescensmikroplattläsare eller flödescytometri (den maximala excitationsvåglängden för Calcein AM-sonden är 501 nm och den maximala emissionsvåglängden är 521 nm.). Cellviabiliteten är proportionell mot fluorescensintensiteten. Beroende på syftet med experimentet kan kärnor också motfärgas ytterligare eller detekteras med andra instrument som fluorescensmikroskopi.

 

 

1. Centrifugera Calcein AM-lösningen kort före användning för att minska reagensförlusten.

2. Calcein AM sönderdelas lätt i fuktiga miljöer. Alikvotera vid mottagandet, försegla tätt och förvara vid -20 grader .

3. Calcein AM är instabilt i vattenlösningar. Calcein AM arbetslösning är färdig att använda och giltig för användning inom 24 timmar.

4. Den optimala inkubationstiden är olika för olika celltyper, som kan justeras och optimeras baserat på färgningsresultaten.

5. Använd en svart platta med flera brunnar för att odla celler när fluorescensmikroplattläsare används för mätningen.

6. Fluorescerande färgämnen kan släckas, hanteras och förvaras åtskilt från ljus.

7. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär skyddsglasögon, handskar eller skyddskläder.

 

Endast för forskning!

 

 

Populära Taggar: calcein am cell viability assay kit（cck-f）, Kina calcein am cell viability assay kit（cck-f） tillverkare, leverantörer, fabrik