Dual-Lumi Dual-Luciferase Reporter Gen Assay Kit

 

Produktnamn	Katt. Inga.	Spec.
Dual-Lumi Dual-Luciferase Reporter Gen Assay Kit	G1701-100T	100T

 

 

Luciferassystemet används mest för att detektera reportergen. De transkriptionella regulatoriska elementen i målgenen klonas in i uppströms och nedströms Luciferas för att konstruera en reportergenplasmid. De transfekterade cellerna behandlas sedan med läkemedel eller andra stimuli, och sedan samlas cellerna upp och lyseras, och luciferasaktiviteten i lysatet mäts. Den transkriptionella regleringseffekten av exogena stimuli, såsom läkemedel, på målgener bestäms av

luciferasaktivitet. I det dubbla fluorescenssystemet introduceras och detekteras två typer av fluorescens utan att interferera med varandra, den ena används som detektionsfluorescens och den andra används som den interna referensfluorescensen för att eliminera skillnaderna i antalet celler och transfektionen effektivitet.

Detta Dual-Lumi Dual Luciferase (Firefly&Ranilla Luciferase) Reporter Gene Assay Kit är designat för att detektera eldflugaluciferasaktivitet genom att först använda eldflugeluciferin som ett substrat och sedan detektera ranillaluciferasaktivitet genom att använda coelenterazin som substrat samtidigt som eldflugefluorescensen släcks. Kitet kännetecknas av snabb detektering, hög känslighet, brett detektionsområde och de två typerna av fluorescensdetektion stör inte varandra.

 

 

Fartyg med torris; Förvara i -80 grad borta från ljus i 12 månader; -20 grad lagras borta från ljus, rekommenderas för användning inom 6 månader.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G1701-100T
G1701-1	Celllysbuffert	50 ml
G1701-2	Firefly Luciferas Reaction Substrat (50×)	200 μL
G1701-3	Firefly Luciferas reaktionsbuffert	10 ml
G1701-4	Ranilla Luciferas reaktionssubstrat (50×)	200 μL
G1701-5	Ranilla Luciferas reaktionsbuffert	10 ml
Manuell		1 st

 

 

1. Förbered 1× Firefly Luciferase Reaction arbetslösning:

1.1. Satsen separeras och tinas vid rumstemperatur och blandas upp och ner för att säkerställa fullständig upplösning av komponenterna. Firefly Luciferase Reaction Substrat (50×) och Ranilla Luciferase Reaction Substrat (50×) ska tinas på is och centrifugeras under en kort tidsperiod för att säkerställa att reagenserna sjunker till botten av röret;

1.2. Späd eldflugans luciferasreaktionssubstrat (50×) 50 gånger med eldflugeluciferasreaktionsbuffert, dvs. 10 μL eldflugeluciferasreaktionssubstrat (50×) och 490 μL eldflugeluciferasreaktionsbuffert blandas väl för att erhålla 500 µL eldfluga. luciferasreaktion arbetslösning för extra användning;

1.3. Ranilla Luciferase Reaction Substrat (50×) späds 50- gånger med Ranilla Luciferase Reaction Buffer, dvs 10 μL Ranilla Luciferase Reaction Substrat (50×) blandas med 490 μL Ranilla Luciferase Reaction Buffer för att erhålla 500 μL av 1× sjönjure luciferasreaktion arbetslösning. Ranilla Luciferase Reaction Buffer blandad väl för att erhålla 500 μL 1× Ranilla Luciferase Reaction Substrat (50×);

Obs: Förbered enligt doseringen för att undvika spill. Det rekommenderas att luciferasreaktionens arbetslösning används nu och förvaras i -20 grad för användning inom en månad för att undvika upprepad frysning och upptining.

2. Cellförbehandling och lysering:

2.1. Celler implanteras i motsvarande plattor och transfekteras eller andra relaterade förbehandlingar enligt de experimentella behoven;

2.2. För vidhäftande celler: efter att ha tagit bort det ursprungliga cellodlingsmediet, tillsätt motsvarande mängd celllysbuffert enligt tabellen nedan för att täcka cellerna; För suspenderade celler, överför cellerna till ett centrifugrör, centrifugera för att avlägsna mediet och tillsätt motsvarande mängd celllysbuffert för att återsuspendera cellerna enligt tabellen nedan;

 

Cellkulturplatta	Celllysbuffert/brunn
6-ja	500 μL
12-ja	300 μL
24-ja	200 μL
48-ja	150 μL
96-ja	100 μL

 

2.3. Efter tillräcklig lysering under 10-20 min vid rumstemperatur, skrapas cellerna och samlas upp i ett 1,5 ml centrifugrör, centrifugeras vid 4 grader, 12000 g under 10 minuter, och supernatanten (cellysat) behålls för extra användning;

3. Fluorescensdetektion:

3.1. Förberedd 1× eldflugeluciferasreaktionsarbetslösning och 1× Ranillaluciferasreaktionsarbetslösning ekvilibreras till rumstemperatur;

3.2. 1× Firefly Luciferase Reaction Work Solution med 100 μL/brunn tillsätts till en ogenomskinlig vit 96-brunnsplatta;

3.3. Cellyssupernatanten från steg 2 tillsätts till 96-brunnsplattan ovan vid 20 μL/brunn;

3.4. Den horisontella oscillationen är enhetlig, så snart som möjligt, använd Luminometer, multifunktionell enzymmarkör med kemiluminescensdetektionsmodul eller andra instrument som kan detektera bioluminescens, kemiluminescensdetektering -- detektion av eldflugeluciferasreportergenaktivitet (fluorescensintensitet);

3.5. 1× Ranilla Luciferase Reaction Work Solution med 100 μL/brunn tillsätts till brunnarna där eldflugans luciferasreportergenaktivitet har detekterats enligt beskrivningen ovan;

3.6. Den horisontella oscillationen är enhetlig, använd så snart som möjligt Luminometer, multifunktionell enzymmarkör med kemiluminescensdetektionsmodul eller andra instrument som kan detektera bioluminescens, kemiluminescensdetektering -- detektion av Ranilla luciferasreportergenaktivitet (fluorescensintensitet).

 

 

1. Före upptäckt måste arbetslösningen 1× Firefly Luciferase Reaction återställas till rumstemperatur före användning.

2. Luciferasreaktionsbufferten har viss utfällning efter upptining, vilket är ett normalt fenomen, och den bör skakas väl före användning för att säkerställa att den är helt upplöst.

3. 1× luciferasreaktionsarbetslösning är mottaglig för oxidation, vid detektering av flera prover bör tillsatsen av 1× luciferasreaktionsarbetslösning kontrolleras inom en kort tidsperiod så långt som möjligt. Det rekommenderas att använda flerkanalspipett för provtillsats och var uppmärksam på om sugvolymen för varje brunn i pipetten är konsekvent.

4. För att förhindra störningar mellan brunnar rekommenderas användning av ogenomskinliga vita brunnsplattor.

5. För din hälsa och säkerhet, vänligen bär labbrock och handskar under drift.

 

Endast för forskning!

 

 

Populära Taggar: dual-lumi dual-luciferas reportergenanalyskit, Kina dual-lumi dubbelluciferas reportergenanalyskit tillverkare, leverantörer, fabrik