PEI 40K Transfektionsreagens

PEI 40K transfektionsreagens (linjäriserat polyetylenimintransfektionsreagens) är en högladdad katjonisk polymer med en molekylvikt på 40,000 baserad på linjäriserad polyetylenimin, som är positivt laddad och effektivt kan binda negativt laddade nukleinsyror för att bilda ett komplex med dem och introducera dem i cellerna, och det är lämpligt för transfektion av plasmid-DNA i celler. PEI 40K (linjäriserad polyetylenimin) transfektionsreagens har låg cytotoxicitet, hög transfektionseffektivitet och låg kostnad, vilket gör det mycket kostnadseffektivt jämfört med liposombaserade transfektionsreagens. Det har validerats att det linjära PEI 40K transfektionsreagenset används allmänt i en mängd olika cellinjer inklusive HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/ 3T3-, Sf9-, HepG2- och Hela-celler, etc., med transfektionseffektivitet så hög som 80%~90%. Koncentrationen av PEI 40K, huvudkomponenten i denna produkt, är 1 mg/ml.

Fartyg med våt is; Förvara vid -20 grad , giltigt i 6 månader. Eller lagra i 4 grader, giltigt i 3 månader.

1. Förberedelse före transfektion av vidhäftande celler (6-brunnsplatta, referenstabell för andra specifikationer):

A) Dagen före transfektion var celler lämpliga att planteras enhetligt i porplattorna vid en

lämplig densitet för att konvergera till 70 – 85 % vid formell transfektion;

B)Före transfektion avlägsnades primärcellsmedia och tvättades 1-2 gånger med PBS innan 1,8 ml basmedium utan serum eller lågt serum (under 5%) eller Opti-MEM ersattes; olika celler hade olika serumberoende beroende på den specifika celltypen;

C) De applicerade cellerna placerades i inkubatorn och beredning av transfektionskomplex påbörjades.

2. Suspensionsceller preparerades före transfektion:

A) På dagen för transfektionen centrifugerades en lämplig mängd celler för att avlägsna mediet

och återsuspenderad med basalt medium utan serum eller lågt serum (under 5 %);

B) De preparerade suspensionscellerna placerades i inkubatorn och påbörjade beredningen av

transfektionskomplex, och volymförhållandet mellan transfektionskomplex och medium skulle kunna

göras med hänvisning till vidhäftande celler för lämpliga justeringar.

3. Transfektionskomplex framställdes:

A) Beredningsvätska A: 100 μL serumfritt basmedium och 2 ug plasmid-DNA, blåsning och

blandad;

B) Beredning av vätska B: 100 L basmedium utan serum och 6-8 μL PEI 40 K Transfektion

Reagens, blåsning och blandning;

C) Lösning B sattes till vätska A, blåstes försiktigt och blandades och inkuberades vid rumstemperatur i

15 min för att bilda ett DNA-PEI-transfektionskomplex.

4. Transfekterade celler:

A) Lägg till transfektionskomplexet som erhållits i föregående steg till den tidigare ändrade hålplattan genom

korsar eller omger lösningen;

B) Skaka plattan "8" eller på annat sätt för att blandas helt och inkuberas i en 37 graders, 5 % CO2-inkubator;

C) DNA-PEI-transfektionskomplex med celler i 4-6 timmar visade bättre transfektionseffektivitet,

lämplig förlängning eller inkubation över natten och bättre transfektionseffektivitet.

1. Använd friska celler i gott skick och återvunna celler rekommenderas att passeras minst 2 gånger före transfektion.

2. Använd ett endotoxinfritt plasmid-DNA av hög kvalitet.

3. För första användningen rekommenderas att produkten dispenseras för att undvika upprepad frysning och upptining.

4. Höga koncentrationer av serum vid transfektion, såväl som användning av antibiotika, kan påverka cellstatus såväl som transfektionseffektivitet.

5. Olika celltolerans, känslighet, längd på transfektionsinkubationstid och PEI/DNA-användningsförhållande justerades på lämpligt sätt.

6. Bär experimentdräkt och engångshandskar vid användning.

Schema: Användning av transfektion i olika cellodlingsbehållare (endast för referens)

Endast för forskning!

Populära Taggar: pei 40k transfektionsreagens, Kina pei 40k transfektionsreagens tillverkare, leverantörer, fabrik