Produktintroduktion

Produktnamn	Katt. Inga.	Spec.
Alkaliskt fosfatas (värmekänsligt)	G3400-1000U	1000 U

Produktintroduktion

Produktbeskrivning:	Servicebio® alkaliskt fosfatas (värmekänsligt) katalyserar frisättningen av 5'- och 3'-fosfatgrupper från DNA, RNA, dNTP och rNTP. Detta enzym tar också bort fosfatgrupper från proteiner.
Applikationer:	l Defosforylering av kloningsvektor-DNA för att förhindra recirkularisering under ligering. l Rengöring av PCR-produkt: nukleotidnedbrytning före sekvensering av PCR-produkt. l Defosforylering av nukleinsyra 5'-terminaler före märkning med T4 polynukleotidkinas.
Källa:	E.coli med en klonad bakteriell AP-gen från AntarcticBacteriumTAB5.
Renhet:	Större än eller lika med 95 % av SDS-PAGE
Molekylvikt	~35 kDa
Koncentration:	5 U/μL
Definition av aktivitetsenhet:	En enhet är mängden enzym som krävs för att katalysera defosforyleringen av 1 µg linjäriserat pUC19 DNA 5'-ände på 10 minuter vid 37 grader. Defosforylering definieras som mer än 95 % inhibering av religering av linjäriserat plasmid-DNA (bestämt genom E. coli-transformation).
10× ALP-reaktionsbuffert:	500 mM Bis-Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ZnCl2, pH 6,0.
Lagringsbuffert (utspädning):	10 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, 0,01 mM ZnCl2, 50 % glycerol, pH 7,4.
Inaktivering eller hämning	l Inhibitorer: metallkelatorer. · l Inaktiveras genom uppvärmning vid 80 grader i 2 minuter.
Förvaringsvillkor:	Förvaras i –20 grader upp till 12 månader.

Produktinnehåll

Komponentnummer	Komponent	G3400-1000U
G3400-1	Alkaliskt fosfatas (värmekänsligt)	200 μL
G3400-2	10×ALP reaktionsbuffert	1 ml
Manuell		Ett exemplar

Analysprotokoll/procedurer

Detta protokoll är lämpligt för avlägsnande av 3'- och 5'-fosfatgrupper från DNA och RNA.

Tina frysta reagenser, blanda och centrifugera kort.
Håll enzymer på is.
Förvara 10×ALP-reaktionsbufferten i rumstemperatur.

1. Förbered följande reaktionsblandning innehållande:

Komponent	Volym
DNA- eller RNA-prov	{} ug
10×ALP reaktionsbuffert	2 μL
Alkaliskt fosfatas (värmekänsligt)	1 μL
Nukleasfritt vatten	Till 20 μL
Total volym	20 μL

2. Blanda noggrant, snurra kort och inkubera vid 37 grader i 15-30 minuter. Den optimala inkubationstiden och enzymkoncentrationen måste bestämmas experimentellt för varje substrat.

3. Stoppa reaktionen genom att värma i 2 minuter vid 80 grader.

4. Enligt behoven av efterföljande experiment kan ovanstående defosforylerade DNA eller RNA renas på en mängd olika sätt (såsom DNA-reningskit, fenolisk kloroformextraktion och etanolutfällningsmetod).

Notera

1. Alkaliskt fosfatas är liksom de flesta alkaliska fosfataser ett Zn2+- och Mg2+--beroende enzym. ALP-reaktionsbufferten ger tillräckligt med Zn2+och Mg2+ för att garantera enzymaktivitet.

1. Alkaliskt fosfatas hämmas av metallkelatorer (t.ex. EDTA), oorganiskt fosfat och fosfatanaloger.

1. Aktiviteten av alkaliskt fosfatas minskar i närvaro av reduktionsmedel (DTT, -ME).

2. Alkaliskt fosfatas ska transporteras på is vid hantering och ska förvaras i -20 grad omedelbart efter användning.

1. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär skyddsglasögon, handskar eller skyddskläder.

Endast för forskning!

Populära Taggar: alkaliskt fosfatas (värmekänsligt), Kina alkaliskt fosfatas (värmekänsligt) tillverkare, leverantörer, fabrik