MagBind MetylGuld DNA Bisulfit Konvertering Kit

 

Produktnamn	Kat.nr.	Spec.
MagBind MetylGuld DNA Bisulfit Konvertering Kit	G3639-50T	50 T

 

 

Epigenetik är en gren av genetik som studerar de ärftliga förändringarna i genuttryck och reglering utan att ändra nukleotidsekvensen av gener. Bland dem är DNA-metylering den tidigast upptäckta och en av de mest djupt studerade epigenetiska regleringsmekanismerna. Hos många djur och växter är DNA-metylering baserad på S-AdenosylMethionine som metyldonator, under katalys av metyltransferas binder den femte kolpositionen i cytosinringen kovalent till en metylgrupp.

DNA-metylering är en naturligt förekommande händelse i prokaryoter och eukaryoter. I prokaryoter skyddar DNA-metylering värd-DNA från att spjälkas av restriktionsendonukleaser, vilket kan eliminera exogent DNA. I högre eukaryoter spelar DNA-metylering en viktig roll i regleringen av genuttryck.

Produkten använder bisulfit för att behandla metylerat DNA och omvandlar ometylerat cytosin till uracil, medan metylerat cytosin förblir oförändrat, hela processen kan slutföras inom 4 timmar och omvandlingseffektiviteten kan nå mer än 99 %. Samtidigt antar kitet metoden för avsvavling och återvinning av DNA på magnetiska pärlor, vilket effektivt kan förbättra återvinningsmängden av transformerat DNA, och hela operationsflödet är mycket enkelt. Det transformerade DNA:t kan användas för PCR-amplifiering och nedströmsanalys, inklusive restriktionsendonukleas-digestion, sekvensering, mikroarray och så vidare.

 

 

Skickas och förvaras i rumstemperatur; gäller i 12 månader.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G3639-50T
G3639-1	CT-konverteringsreagens	10 gånger / rör×5
G3639-2	Buffert BM	1,5 ml
G3639-3	Buffert GB	10 ml
G3639-4	Buffert DB	3,6 mL (8,4 mL vattenfri etanol tillsatt före användning)
G3639-5	Buffert PW	24 mL (56 mL vattenfri etanol tillsatt före användning)
G3639-6	SweMag Pärlor	1 ml
G3639-7	Nukleasfritt vatten	10 ml
Manuell		Ett exemplar

 

 

1. Tillsätt 280 μL buffert BM och 910 μL nukleasfritt vatten till CT-konverteringsreagens före användning, vortexa sedan för att lösas upp och förvara vid -20 grad.

2. Tillsätt 8,4 mL vattenfri etanol till Buffer DB före användning, tillsätt 56 mL vattenfri alkohol till Buffer PW, blanda väl och använd.

3. Magnetiska stativ och isopropanol krävs men medföljer inte i denna sats.

 

 

1. Tillsätt 20 μL genomiskt DNA (den totala mängden är 500 ng-2000 ng, och om volymen är mindre än 20 μL kan den kompletteras med nukleasfritt vatten) till PCR-röret. Tillsätt 130 μL CT-konverteringsreagens och blanda försiktigt med en pipett.

2. Överför blandningen från det första steget till PCR-instrumentet och ställ in den på 98 grader i 10 minuter och 64 grader i 2,5 timmar. Efter drift förvaras produkten vid 4 grader.

3. Tillsätt 150 μL Buffer GB och 130 μL isopropanol till ovanstående produkter, använd en pipett för att blanda väl, tillsätt sedan 15 μL SweMag Beads (Vortex till jämnt fördelad före användning), och använd en pipett för att blåsa tills pärlorna är jämnt fördelade .

4. Stå i rumstemperatur i 10 min. Under denna period, blanda jämnt 3 ~ 4 gånger med en pipett för att hålla de magnetiska pärlorna jämnt fördelade.

5. Flytta centrifugröret till magnetstativet och låt stå i 30 s, så att de magnetiska pärlorna adsorberas till rörets vägg. När den är klar, kassera supernatanten (för att undvika att påverka extraktionseffektiviteten, sug inte ut de magnetiska pärlorna).

6. Ta bort centrifugröret från det magnetiska stativet, tillsätt 400 μL Buffer PW, blås med en pipett tills de magnetiska pärlorna är jämnt fördelade. Flytta sedan centrifugröret till magnetstativet och låt stå i 30 s, så att de magnetiska pärlorna adsorberas på rörets vägg. När den är klar, kassera supernatanten (för att undvika att påverka extraktionseffektiviteten, sug inte ut de magnetiska pärlorna).

7. Ta bort centrifugröret från magnetstativet, tillsätt 200 μL Buffer DB, blås det med en pipett tills de magnetiska pärlorna är jämnt fördelade, ställ i rumstemperatur i 15 minuter, blanda var 3~5 min under perioden (Buffer DB bearbetningstiden bör inte vara för lång för att undvika överdriven fragmentering av genomiskt DNA). Flytta centrifugröret till det magnetiska stativet och låt stå i 30 sekunder, så att de magnetiska pärlorna adsorberas till rörets vägg, och efter att det är klart, kassera supernatanten (för att undvika att påverka extraktionseffektiviteten, sug inte de magnetiska pärlorna ut).

8. Ta bort centrifugröret från magnetstativet, tillsätt 400 μL Buffer PW, blås med en pipett tills de magnetiska pärlorna är jämnt fördelade. Flytta sedan centrifugröret till magnetstativet och låt stå i 30 s, så att de magnetiska pärlorna adsorberas på rörets vägg. När den är klar, kassera supernatanten (för att undvika att påverka extraktionseffektiviteten, sug inte ut de magnetiska pärlorna).

9. Upprepa steg 8.

10. Öppna locket till centrifugröret, låt det stå i rumstemperatur i 5~10 min eller vid 65 grader i 3~5 min för att få etanolen att avdunsta helt (gör inte magnetpärlorna för torra för att inte påverka utbytet av nukleinsyra).

11. Ta bort centrifugröret från magnetstativet, tillsätt 30~50 μL nukleasfritt vatten till centrifugröret, blås tills de magnetiska pärlorna är jämnt fördelade med en pipett, låt stå i rumstemperatur i 5 minuter.

12. Flytta centrifugalröret till magnetstativet tills de magnetiska pärlorna är fullständigt adsorberade och absorbera supernatanten i ett nytt centrifugrör för att erhålla den konverterade DNA-lösningen.

 

 

1. Läs produktmanualen noggrant före användning.

2. Magnetiska pärlor fälls ut lätt och bör skakas eller vortexas noggrant före användning.

3. Bearbetningstiden för Buffer DB bör inte vara för lång, det är lätt att orsaka överdriven fragmentering av DNA och påverka uppföljningsexperimenten.

4. Före eluering bör etanol förångas fullständigt för att undvika påverkan av kvarvarande etanol på experiment nedströms.

5. Torka inte de magnetiska pärlorna under en längre tid, eftersom detta kan orsaka irreversibel pärlaggregation.

6. Det återvunna DNA:t bör lagras i -20 grad för att undvika upprepad frysning och upptining.

7. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär en labbrock och engångshandskar.

 

Endast för forskning!

 

 

Populära Taggar: magbind methylgold dna bisulfit konverteringssats, Kina magbind methylgold dna bisulfite konvertering kit tillverkare, leverantörer, fabrik