Immunfärgande antikropp-eluent

 

Produktnamn	Katt. Inga.	Spec..
Immunfärgande antikropp-eluent	G1266	30 ml

 

 

Denna produkt används för eluering av primära och sekundära antikroppar under immunofluorescens (IF), immunhistokemi (IHC) och immuncytokemi (ICC) immunfärgning av vävnader och celler. Denna immunfärgande antikroppseluent har fördelarna med enkel operation, milda förhållanden och stark elueringseffekt. Det kan helt eluera primära och sekundära antikroppar utan att skada provets morfologi och struktur. Den är särskilt lämplig för antikroppselusionen i TSA-immunfluorescens-multietikettexperimentet av paraffinsnitt, frysta snitt, cellglas, cellutstryk, etc. av hjärna, ben, hud, aortaklaff, etc. Den icke-kovalent bundna primära antikroppen och målproteinet, den andra antikroppen och den primära antikroppen avbröts och eluerades för att avlägsna påverkan på efterföljande antikroppsmärkning.

 

 

2~8 graders lagring och transport, giltig i 6 månader.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G1266-30 mL
G1266	Immunfärgande antikroppseluent	30 ml
Manuell		1 st

 

 

Denna produkt är färdig att använda och kräver inte utspädning. Innan användning, ta bort antikroppseluenten från kylskåpet och återställ den till rumstemperatur innan du tillsätter en liten mängd antikroppseluent för att täcka provet, inkubera vid rumstemperatur i 5 minuter, kassera sedan eluenten, tillsätt tillräckligt med eluent igen för att helt täcka vävnaden. , inkubera vid 37 grader i 30 minuter, placera objektglaset i TBST och tvätta det på ett skakbord i 3 gånger, för 5 min varje gång.

Appliceringen av antikroppseluenten beskrivs i detalj med exemplet på TSA-fluorescerande multimärkning i paraffinsnitt:

1. Vävnadssektioner avvaxades till vatten: I tur och ordning sattes sektionerna i miljövänlig avvaxningslösning I (G1128) i 10 min - Miljövänlig avvaxningslösning II (G1128) i 10 min - Miljövänlig avvaxningslösning III (G1128) ) i 10 min - vattenfri etanol Ⅰ i 5 min - vattenfri etanol Ⅱ i 5 min - vattenfri etanol Ⅲ i 5 min - och tvättas med destillerat vatten;

2. Antigenreparation: Enligt vävnadstyp och antikroppstyp, välj motsvarande antigenreparationslösning (G1219,pH6.0; G1207,pH8.0; G1218,pH9 .0) och reparationsläge för antigenreparation. Den allmänna reparationsmetoden är antigenreparationsinstrument (Servicebio kommande produkter), mikrovågsugn, högtrycksreparationer och andra högtemperaturreparationer. Under denna process bör reparationslösningen förhindras från överdriven avdunstning och bör inte torkas. Efter naturlig kylning placerades objektglaset i PBS (G2156) och tvättades genom skakning på pendelbordet (SYC-Z100) under 3 gånger, 5 minuter varje gång.

3. Pap Pen rita cirkel och försegla med väteperoxid: Efter att sektionerna har torkat något, rita cirklar runt vävnaderna med en Pap-penna (G6100), som vanligtvis är cirka 3 mm från vävnaderna. Efter att cirklarna är färdiga, tvätta dem med rent vatten (G4701) eller PBS (G2156) efter att cirklarna har torkat, och lägg sedan sektionerna i 3% väteperoxidlösning och inkubera i rumstemperatur i 25 minuter för att blockera endogent peroxidas . Efter stängning placerades objektglaset i PBS (G2156) och tvättades genom skakning på pendelbord (SYC-Z100) under 3 gånger, 5 minuter varje gång.

4. Serumblockering: Efter att sektionen har torkats något, tillsätts 3 % BSA eller serum till vävnaden och förseglas vid rumstemperatur i 30 minuter, och blockeringsreagenset bestäms enligt den primära och sekundära antikroppsarten.

5. Lägg till den första primära antikroppen: Skaka försiktigt av tätningslösningen, tillsätt den primära antikroppen i en viss proportion till skivan, lägg skivan platt i en våt låda (SIB-20F), inkubera vid 4 grader över natten . (Tillsätt en liten mängd vatten i botten av den våta lådan för att förhindra att antikroppen avdunstar)

6. Tillsätt motsvarande HRP-märkt sekundär antikropp: Objektglaset placerades i PBS (G2156) och tvättades på pendelskakaren (SYC-Z100) under 3 gånger, 5 minuter varje gång. Efter att skivorna hade torkats något sattes den belagda vävnaden av sekundär antikropp märkt med HRP av motsvarande art av primär antikropp till ringen och inkuberades vid rumstemperatur under 50 minuter.

7. Lägg till iF488-TSA: Objektglaset placerades i PBS (G2156) och tvättades genom att skaka på pendelbordet (SYC-Z100) i 3 gånger, 5 minuter varje gång. Efter att skivorna torkats något sattes den beredda iF488-TSA (G1231)-arbetsvätskan till ringen och inkuberades i 10 minuter vid rumstemperatur borta från ljus. Efter inkubation placerades objektglasen i TBST (G2150) och tvättades på en pendelskakare (SYC-Z100) under 3 gånger, 5 minuter varje gång.

8. Antikroppseluentbehandling: Efter att sektionerna torkats något spreds antikroppselueringsmedlet som återställts till rumstemperatur över hela vävnaden. Efter inkubering vid rumstemperatur under 5 minuter avlägsnades antikroppselueringsmedlet och en tillräcklig mängd antikroppselueringsmedel tillsattes igen för att helt täcka vävnaden. Efter inkubering vid 37 grader i 30 minuter placerades objektglaset i TBST (G2150) och tvättades på pendelbordet (SYC-Z100) i 3 gånger. 5 minuter varje gång.

9. Serumblockering: Efter att sektionen har torkat något, tillsätts 3 % BSA eller serum till vävnaden och förseglas vid rumstemperatur i 30 minuter, och blockeringsreagenset bestäms enligt den primära och sekundära antikroppsarten.

10. Lägg till en andra primär antikropp: Skaka försiktigt av tätningslösningen, tillsätt den primära antikroppen i en viss proportion till skivan, lägg skivan platt i en våt låda (SIB-20F), inkubera vid 4 grader över natten . (Tillsätt en liten mängd vatten i botten av den våta lådan för att förhindra att antikroppen avdunstar)

11. Tillsätt motsvarande HRP-märkt sekundär antikropp: Objektglaset placerades i PBS (G2156) och tvättades på pendelskakaren (SYC-Z100) under 3 gånger, 5 minuter varje gång. Efter att skivorna hade torkats något sattes den belagda vävnaden av sekundär antikropp märkt med HRP av motsvarande art av primär antikropp till ringen och inkuberades vid rumstemperatur under 50 minuter.

12. Lägg till iF555-TSA: Objektglaset placerades i PBS (G2156) och tvättades genom att skaka på pendelbordet (SYC-Z100) i 3 gånger, 5 minuter varje gång. Efter att skivorna torkats något sattes den beredda iF555-TSA (G1233) arbetsvätskan till ringen och inkuberades i 10 minuter vid rumstemperatur borta från ljus. Efter inkubation placerades objektglasen i TBST (G2150) och tvättades på en pendelskakare (SYC-Z100) under 3 gånger, 5 minuter varje gång.

13. Antikroppseluentbehandling: Efter att sektionerna torkats något spreds antikroppselueringsmedlet som återställts till rumstemperatur över hela vävnaden. Efter inkubering vid rumstemperatur under 5 minuter avlägsnades antikroppselueringsmedlet och en tillräcklig mängd antikroppselueringsmedel tillsattes igen för att helt täcka vävnaden. Efter inkubering vid 37 grader i 30 minuter placerades objektglaset i TBST (G2150) och tvättades på pendelbordet (SYC-Z100) i 3 gånger. 5 minuter varje gång.

Obs! Steg 4-7 är en omgång av antikroppsmärkningsprocess, varje omgång av antikroppsmärkning behöver bara byta TSA-reagens med olika fluoresceinmärkning (iF647-TSA G1232; iF594-TSA G1242 ; iF440-TSA G1250; iF546-TSA G1251; G1252; iF750-TSA G1258). Efter en omgång av antikroppsmärkning, inkubera antikroppseluenten vid 37 grader i 30 minuter, ta bort de primära och sekundära antikropparna märkta i denna omgång och fortsätt sedan nästa omgång av antikroppsmärkning. Beroende på antalet fluorescerande multi-märkta antikroppar, upprepa steg 4-7 tills all antikroppsmärkning är klar.

14. DAPI-kvarhållande kärnor: Efter att sektionerna torkats något sattes DAPI-färglösning (G1012) till cirkeln och inkuberades i 10 minuter vid rumstemperatur borta från ljus.

15. Autofluorescenssläckning: Objektglaset placerades i PBS (G2156) och tvättades genom skakning på pendelbordet (SYC-Z100) under 3 gånger, 5 minuter varje gång. Efter att sektionerna torkats något tillsattes vävnadssjälvfluorescenssläckaren (G1221-2) i ringen och inkuberades i 5 minuter i mörker och sköljdes sedan under vatten i 10 minuter.

16. Försegling: Sektionen är lätt torkad och förseglad med anti-fluorescenshärdande förseglingstablett (G1401).

17. Mikroskopisk fotografering: Sektioner ses under ett fluorescensmikroskop och bilder samlas in eller skannas med en fluorescensskanner.

 

 

1. Effekten av antikroppseluering beror på snitttjocklek, elueringstemperatur och elueringstid. 4~8 μm skivor behandlas vanligtvis i en våt låda vid 37 grader i 30 min.

2. För att säkerställa effekten av antikroppseluering och fluorescerande multi-label-märkning, rekommenderas att först märka strukturellt membranprotein och cytoskelettprotein, sedan cytoplasmatiskt protein och slutligen nukleärt protein.

3. Om vissa antikroppar har stark affinitet och inte är lätta att eluera fullständigt (såsom hjärnvävnad GFAP), kan tvätttemperaturen höjas till 50 grader i 30 minuter, eller antalet eluering kan ökas, det vill säga efter tillsats antikroppseluent till vävnaden och inkubering vid 37 grader i 30 minuter, antikroppseluenten avlägsnas och en ny antikroppseluent tillsätts, och inkubationen fortsätter vid 37 grader i 30 min.

4. Denna antikroppseluent har stark flytbarhet och när filmen inte placeras horisontellt är reagenset lätt att rinna ut ur ringen, vilket påverkar elueringseffekten. Det är nödvändigt att vara uppmärksam på sektionen som ligger platt under drift.

5. Bär handskar, mask och labbrock för att undvika kontakt med hud och ögon. Vid kontakt med känsliga områden, skölj omedelbart med mycket vatten.

6. Reagensens titer efter utgångsdatumet kan minska, så använd den inom utgångsdatumet för reagenset.

 

Endast för forskning!

 

 

Populära Taggar: immunfärgande antikroppseluent, Kina immunfärgande antikroppseluent tillverkare, leverantörer, fabrik